植物（Plant）單萜烯合成酶(MTPS)ELISA檢測(cè)試劑盒本試劑盒只能用于科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷檢測(cè)原理試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被單萜烯合成酶(MTPS)抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成＊終的黃色。顏色的深淺和樣品中的單萜烯合成酶(MTPS)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測(cè)定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品含濃度。樣品收集、處理及保存方法1. 樣本不能含疊氮鈉（NaN3），因?yàn)榀B氮鈉（NaN3）是辣根過氧化物酶（HRP）的抑制劑。2. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行。3. 植物萃取液或其它相關(guān)樣本：請(qǐng)1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)。4. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。自備物品1. 酶標(biāo)儀（450nm）2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3. 37℃恒溫箱操作注意事項(xiàng)1. 試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶，這屬于正常現(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再使用。2. 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。3. 濃度為0的S0號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品即可視為陰性對(duì)照或者空白；按照說明書操作時(shí)樣本已經(jīng)稀釋5倍，＊終結(jié)果乘以5才是樣本實(shí)際濃度。4. 嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。5. 所有液體組分使用前充分搖勻。試劑盒組成名稱96孔配置48孔配置備注微孔酶標(biāo)板12孔×8條12孔×4條無標(biāo)準(zhǔn)品0.3mL*6管0.3mL*6管無樣本稀釋液6mL3mL無檢測(cè)抗體-HRP10mL5mL無20×洗滌緩沖液25mL15mL按說明書進(jìn)行稀釋底物A6mL3mL無底物B6mL3mL無終止液6mL3mL無封板膜2張2張無說明書1份1份無自封袋1個(gè)1個(gè)無注：標(biāo)準(zhǔn)品（S0-S5）濃度依次為：0、30、60、120、240、480 pg/ml試劑的準(zhǔn)備 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。洗板方法1. 手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。2. 自動(dòng)洗板機(jī)：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。操作步驟1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；3. 樣本孔先加待測(cè)樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。4. 除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。7. 每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測(cè)定各孔的OD值。結(jié)果判斷 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：在Excel工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)OD值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線，按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值。 試劑盒性能1. 準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值，大于等于0.9900。2. 靈敏度：＊低檢測(cè)濃度小于1.0pg/ml。3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。4. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。5. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。6. 有效期：6個(gè)月免責(zé)聲明1. 試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn)，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)，本公司概不負(fù)責(zé)。2. 嚴(yán)格按照說明書操作，實(shí)驗(yàn)者違反說明書操作，后果由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)。
植物（Plant）單萜烯合成酶(MTPS)ELISA檢測(cè)試劑盒本試劑盒只能用于科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷檢測(cè)原理試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被單萜烯合成酶(MTPS)抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成＊終的黃色。顏色的深淺和樣品中的單萜烯合成酶(MTPS)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測(cè)定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品活性。樣品收集、處理及保存方法1. 樣本不能含疊氮鈉（NaN3），因?yàn)榀B氮鈉（NaN3）是辣根過氧化物酶（HRP）的抑制劑。2. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行。3. 植物萃取液或其它相關(guān)樣本：請(qǐng)1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)。4. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。自備物品1. 酶標(biāo)儀（450nm）2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3. 37℃恒溫箱操作注意事項(xiàng)1. 試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶，這屬于正常現(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再使用。2. 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。3. 濃度為0的S0號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品即可視為陰性對(duì)照或者空白；按照說明書操作時(shí)樣本已經(jīng)稀釋5倍，＊終結(jié)果乘以5才是樣本實(shí)際濃度。4. 嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。5. 所有液體組分使用前充分搖勻。試劑盒組成名稱96孔配置48孔配置備注微孔酶標(biāo)板12孔×8條12孔×4條無標(biāo)準(zhǔn)品0.3mL*6管0.3mL*6管無樣本稀釋液6mL3mL無檢測(cè)抗體-HRP10mL5mL無20×洗滌緩沖液25mL15mL按說明書進(jìn)行稀釋底物A6mL3mL無底物B6mL3mL無終止液6mL3mL無封板膜2張2張無說明書1份1份無自封袋1個(gè)1個(gè)無注：標(biāo)準(zhǔn)品（S0-S5）濃度依次為：0、12.5、25、50、100、200 U/L試劑的準(zhǔn)備 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。洗板方法1. 手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。2. 自動(dòng)洗板機(jī)：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。操作步驟1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；3. 樣本孔先加待測(cè)樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。4. 除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。7. 每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測(cè)定各孔的OD值。結(jié)果判斷 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：在Excel工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)OD值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線，按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值。 試劑盒性能1. 準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值，大于等于0.9900。2. 靈敏度：＊低檢測(cè)濃度小于1.0 U/L。3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。4. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。5. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。6. 有效期：6個(gè)月免責(zé)聲明1. 試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn)，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)，本公司概不負(fù)責(zé)。2. 嚴(yán)格按照說明書操作，實(shí)驗(yàn)者違反說明書操作，后果由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)。
乳酸脫氫酶（Lactate Dehydrogenase，LDH）試劑盒說明書 分光光度法 50管/24樣正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：LDH（EC 1.1.1.27）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是糖酵解途徑的末端酶，催化丙酮酸與乳酸之間的可逆反應(yīng)，伴隨著NAD+/NADH之間互變。測(cè)定原理：LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸，丙酮酸進(jìn)一步與2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，在堿性溶液中顯棕紅色，顏色深淺與丙酮酸濃度成正比。需自備的儀器和用品：可見分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。試劑的組成和配制：提取液：30mL×1瓶， 4℃保存；試劑一：液體15 mL×1瓶， 4℃保存； 試劑二：粉劑×1支，-20℃保存，用時(shí)加入10μL試劑五和1.3 mL蒸餾水充分溶解備用，用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融；試劑三：液體15 mL×1瓶，4℃保存； 試劑四：液體50 mL×1瓶，4℃保存； 試劑五：液體100μL×1支，4℃保存； 樣品測(cè)定的準(zhǔn)備：1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為1000~5000：1的比例（建議2000萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。2、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。測(cè)定步驟：1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至450nm，蒸餾水調(diào)零。2、樣本測(cè)定（在EP管中加入下列試劑）試劑名稱(μL)測(cè)定管對(duì)照管樣本5050試劑一250250試劑二50蒸餾水50充分混勻，37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）水浴15min試劑三250250充分混勻，37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）水浴15min試劑四750750充分混勻，室溫靜置15分鐘，450 nm下測(cè)定吸光度，計(jì)算ΔA=A測(cè)定管-A對(duì)照管。每個(gè)測(cè)定管需要設(shè)一個(gè)對(duì)照管。LDH活力單位的計(jì)算：1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸曲線， y = 0.9108x+0.0037 (x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度，umol/mL；y為ΔA)。2、血清（漿）LDH活力的計(jì)算單位的定義：每mL血清（漿）每分鐘催化產(chǎn)生1nmol丙酮酸定義為一個(gè)酶活力單位。LDH（nmol/min/mL）=（ΔA-0.0037）÷0.9108÷T×103=73.2×ΔA3、細(xì)胞、細(xì)菌和組織中LDH活力的計(jì)算（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1 nmol丙酮酸定義為一個(gè)酶活力單位。LDH（nmol/min/mg prot）=[（ΔA-0.0037）÷0.9108×V1]÷(V1×Cpr)÷T×103 =73.2×ΔA÷Cpr需要另外測(cè)定，建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量測(cè)定試劑盒。（2） 按樣本鮮重計(jì)算：單位的定義：每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol丙酮酸定義為一個(gè)酶活力單位。LDH（nmol/min/g鮮重）=[（ΔA-0.0037）÷0.9108×V1]÷(W×V1÷V2)÷T×103 =73.2×ΔA÷W（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：單位的定義：每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol丙酮酸定義為一個(gè)酶活力單位。LDH（nmol/min/104 cell）= [（ΔA-0.0037）÷0.9108×V1]÷(2000×V1÷V2)÷T×103 =0.037×ΔAV1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.05mL；V2：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，15 min；Cpr：蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；2000：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，2000萬。1、 標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍為：0.1 umol/mL -2 umol/mL。2、 ΔA線性范圍為：0.01 -2。
乙醇脫氫酶（alcohol dehydrogenase，ADH）活性測(cè)定試劑盒說明書 分光光度法 50管/48樣注意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。測(cè)定意義：ADH是生物體內(nèi)短鏈醇代謝的關(guān)鍵酶，催化乙醇與乙醛可逆轉(zhuǎn)換，在很多生理過程中起著重要作用。哺乳動(dòng)物ADH主要在肝臟生成，肝臟損傷導(dǎo)致ADH釋放到血清中。血清ADH活性高低反映了肝功能是否異常。測(cè)定原理：ADH催化NADH還原乙醛生成乙醇和NAD+，NADH在340nm處有吸收峰，而NAD+沒有；測(cè)定340nm 吸光度下降速率，來計(jì)算ADH活性。自備儀器和用品：研缽、冰、低溫離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)、1mL石英比色皿、可調(diào)式移液器和蒸餾水。試劑組成和配制：試劑一：液體×1瓶，室溫保存。試劑二：液體×1瓶，4℃保存。 試劑三：粉劑×2瓶，－20℃保存。臨用前加入22mL試劑二，現(xiàn)配現(xiàn)用。試劑四：液體×1支，4℃保存。粗酶液提取：1、 組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。16000g，4℃離心20min，取上清置冰上待測(cè)。 2、 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；16000g， 4℃離心20min，取上清液置冰上待測(cè)。3、血清等液體：直接測(cè)定。ADH測(cè)定操作： 1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長到340 nm，蒸餾水調(diào)零。2. 試劑三在25℃水浴中保溫30 min。3. 在1mL石英比色皿中依次加入100μL樣本上清液、800μL試劑三和100μL試劑四，迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化，分別記錄15s和75s時(shí)吸光值，分別記為A1和A2。△A測(cè)定管=A1-A2。計(jì)算公式：（1）按照蛋白濃度計(jì)算活性單位定義：25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol NADH 為1個(gè)酶活單位。ADH (nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷(Cpr×V樣)÷T=1608×△÷Cpr（2）按照樣本質(zhì)量計(jì)算活性單位定義：25℃中每克組織每分鐘氧化1nmol NADH 為1個(gè)酶活單位。ADH (nmol/min/g鮮重) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷(W×V樣÷V樣總)÷T=1608×△A÷W（3）按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算活性單位定義：25℃中每104個(gè)細(xì)胞每分鐘氧化1nmol NADH 為1個(gè)酶活單位。ADH (nmol/min/104cell) =(△A÷ε÷d×V反總×109)÷(細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T=1608×△A ÷細(xì)胞數(shù)量（4）按液體體積計(jì)算活性單位定義：25℃中每毫升血清每分鐘氧化1nmol NADH 為1個(gè)酶活單位。ADH (nmol/min/mL) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷V樣÷T=1608×△A ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103L/mol/cm；d：比色皿光徑，1 cm；V反總：反應(yīng)體系總體積，1000μL=0.001 L；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，100μL=0.1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，1min。
乙醛脫氫酶（acetaldehyde dehydrogenase，ALDH）試劑盒說明書分光光度法50管/48樣注意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。測(cè)定意義乙醛脫氫酶 (EC 1.2.1.10)是醛脫氫酶的一種，廣泛存在于各種動(dòng)物、植物和微生物體內(nèi)。主要作用是將乙醛氧化成乙酸，在酒精代謝中起主要作用。在人類和許多動(dòng)物體內(nèi)，線粒體乙醛脫氫酶能把對(duì)生物體有害的醇類轉(zhuǎn)化，所以在細(xì)胞解毒研究中乙醛脫氫酶受到高度關(guān)注；同時(shí)，乙醛脫氫酶在分子生物學(xué)以及相關(guān)疾病的檢測(cè)方面有較廣泛的研究應(yīng)用。測(cè)定原理在輔酶Ⅰ存在的條件下，乙醛脫氫酶催化乙醛和NAD+轉(zhuǎn)化為乙酸和NADH，在340nm處的吸光值會(huì)增加，測(cè)定340nm處的吸光值變化，可計(jì)算得到乙醛脫氫酶的活性。 自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器天平、離心機(jī)、恒溫水浴鍋、紫外分光光度計(jì)、1mL石英比色皿、蒸餾水。試劑組成和配制提取液：液體50mL×1瓶，4℃保存。試劑一：液體15mL×1瓶，4℃保存。試劑二：液體5mL×1瓶，4℃避光保存。試劑三：液體3mL×1瓶，4℃避光保存。試劑四：液體2mL×1支，4℃保存。試劑五：液體2mL×1支，4℃保存。ALDH提取1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后，10000g，4℃，離心20min。2. 細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后10000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測(cè)。3. 液體：直接檢測(cè)。測(cè)定操作表對(duì)照管測(cè)定管樣本（μL）200試劑一（μL）300300試劑二（μL）100100試劑三（μL）5050試劑四（μL）3030試劑五（μL）2020H2O（μL）500300充分混勻，1mL石英比色皿，對(duì)照管調(diào)零， 于340nm處測(cè)定吸光值A(chǔ)1，迅速置于37℃水浴1min，于340nm處測(cè)定吸光值A(chǔ)2，△A= A2-A1。ALDH酶活計(jì)算
FDA水解酶（Fluorescein diacetate，F(xiàn)DA）試劑盒說明書 微量法 100T/48S注意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。測(cè)定意義FDA水解反應(yīng)能很好的反應(yīng)土壤中微生物活性和土壤質(zhì)量的變化以及生態(tài)系統(tǒng)中有機(jī)質(zhì)的轉(zhuǎn)化，是土壤質(zhì)量研究中的重要生物學(xué)指標(biāo)之一。測(cè)定原理FDA是一種無色化合物，在介質(zhì)中能被許多土壤酶所催化水解，并經(jīng)脫水反應(yīng)，產(chǎn)生酶解終產(chǎn)物熒光素，穩(wěn)定不易被分解，并在490nm處有強(qiáng)吸收峰，通過檢測(cè)490nm處的吸光值變化可計(jì)算得FDA水解酶活性。自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器天平、低溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。試劑組成和配制標(biāo)準(zhǔn)液：液體4mL×1瓶，4℃保存。試劑一：液體40mL×1瓶，4℃保存。試劑二：粉劑1瓶，-20℃避光保存，臨用前加4mL試劑三溶解。試劑三：液體40mL×1瓶，4℃保存。樣本處理稱取風(fēng)干過30-50目篩土壤約0.1g，備用。測(cè)定操作表空白管標(biāo)準(zhǔn)管對(duì)照管測(cè)定管樣本（g）0.050.05標(biāo)準(zhǔn)液（μL）40雙蒸水（μL）40試劑一（μL）200200240200試劑二（μL）40充分混勻，30℃，震蕩1h試劑三（μL）16016016016010000g，25℃，離心5min，取200μL上清于微量石英比色皿/96孔板中測(cè)定490nm處吸光值A(chǔ)，△A1=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管，△A2=A測(cè)定管-A對(duì)照管注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。酶活性計(jì)算公式a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下酶活性定義：每克土壤每天產(chǎn)生1μmol熒光素的量為一個(gè)酶活力單位。FDA活性（μmol/d/g）=（△A2÷△A1×C標(biāo)準(zhǔn)品）×V反總÷W = 0.96×（△A2÷△A1）÷Wb. 用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下酶活性定義：每克土壤每天產(chǎn)生1μmol熒光素的量為一個(gè)酶活力單位。FDA活性（μmol/d/g）=（△A2÷△A1×C標(biāo)準(zhǔn)品）×V反總÷W = 0.96×（△A2÷△A1）÷WC標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品濃度100μmol/L；V反總：反應(yīng)總體積，0.4mL；W：樣本質(zhì)量，g注意事項(xiàng)1. 盡量采用新鮮土樣或者短期低溫保存樣品，否則很難準(zhǔn)確反映酶的活性。2. 測(cè)定之前進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，若吸光值較高，請(qǐng)進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂屧贉y(cè)定，并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
水土中總磷酸鹽試劑盒說明書 微量法100T/96S注意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。測(cè)定意義總磷酸鹽包含正磷酸鹽、偏磷酸鹽、焦磷酸鹽、多聚磷酸鹽等各種磷酸鹽的形式，反應(yīng)了水土中的磷酸鹽水平，是一個(gè)水質(zhì)和土壤質(zhì)量評(píng)價(jià)的重要指標(biāo)。測(cè)定原理在酸性溶液中，在分解劑和高溫條件下，將無機(jī)磷酸鹽和有機(jī)磷酸鹽水解成正磷酸鹽，正磷酸鹽可與鉬酸銨反應(yīng)成磷鉬酸，在還原劑存在時(shí)被還原為磷鉬藍(lán)，在710nm處有特征吸收峰。需自備的儀器和用品天平，震蕩儀、常溫離心機(jī)、酶標(biāo)儀、96孔板、蒸餾水。試劑組成和配制試劑一：液體20mL×1瓶，4℃保存。試劑二：液體40mL×1瓶，4℃保存。試劑三：液體4mL×1瓶，4℃避光保存。試劑四：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加4mL蒸餾水充分溶解，然后將試劑五全部加入試 劑四中充分混勻。試劑五：液體×1支，4℃保存。樣品處理1. 水樣：按照水樣體積（mL）：試劑一體積（mL）：試劑二體積（mL）為10:1:2的比例（建議取1mL水樣，加入100μL試劑一和200μL試劑二）95℃沸水浴30min，冷卻后待測(cè)。2. 土樣：按照土壤質(zhì)量（g）：蒸餾水體積(mL)：試劑一體積（V）：試劑二體積（V）=1：10:1:2（建議稱取約0.1g土樣，加入1mL蒸餾水，再加入100μL試劑一和200μL試劑二），95℃沸水浴振蕩30min，10000g ，25℃離心10min，取上清液待測(cè)。測(cè)定操作表空白管測(cè)定管樣本（μL）40試劑三（μL）4040試劑四（μL）4040蒸餾水（μL）12080充分混勻，25℃靜置10min，于96孔板測(cè)定710處吸光值A(chǔ)，分別記為A空白管和A測(cè)定管，△A=A測(cè)定管-A空白管計(jì)算公式標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.0237x + 0.0016，R2 = 0.9989；x為PO4-濃度μg/mL，y為吸光值△A。1. 水樣：總磷酸鹽含量（μg/mL）= (△A-0.0016)÷ 0.0237×V樣÷（V樣÷V樣總） = 54.8×(△A-0.0016)2. 土樣：總磷酸鹽含量（μg/g）= (△A+0.0063)÷ 0.0489×V樣÷（W×V樣÷V樣總） =54.8×(△A+0.0063)÷WV樣：加入樣本體積；0.04mL；V樣總：樣本總體積，1.3mL；W，土樣質(zhì)量，g。注意事項(xiàng)1. 配制的試劑四一周內(nèi)使用完。2. 檢出限為65μg/mL或65μg/g。
酸性土壤速效磷試劑盒說明書微量法100T/96S注意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。測(cè)定意義速效磷是土壤中可被植物吸收的磷組分，包括全部水溶性磷、部分吸附態(tài)磷及有機(jī)態(tài)磷，土壤中速效磷是限制植物生長主要因子之一。測(cè)定原理用雙酸法提取酸溶性磷和吸附態(tài)磷，用鉬銻抗比色法測(cè)定。自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器天平、常溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、震蕩儀。試劑組成和配制提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存。試劑一：液體6mL×1支，4℃保存。試劑二： 粉劑×1支，4℃避光保存。臨用前加2mL蒸餾水溶解。用不完的試劑4℃保存。試劑三： 粉劑×3支，4℃避光保存。臨用前加1mL蒸餾水溶解。現(xiàn)配現(xiàn)用。樣本處理新鮮土樣風(fēng)干，過30-50目篩，按照土壤質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g土樣，加入1mL提取液），振蕩提取30min，10000g ，25℃離心10min，取上清液待測(cè)。測(cè)定步驟1、 取試劑三一支，加入1mL蒸餾水充分溶解待用。2、 顯色液的配制（可測(cè)50個(gè)樣）：取EP管一支，加入660μL試劑一，再加入100μL試劑二，充分混勻后，再加入240μL試劑三，充分混勻待用；配好的顯色液應(yīng)為黃色，若變藍(lán)則為磷污染；顯色液必須現(xiàn)配現(xiàn)用；若一次性測(cè)不了50個(gè)樣，可按比例縮小各試劑體積。3、 操作表空白管測(cè)定管樣本（μL）40提取液（μL）40顯色液（μL）2020H2O（μL）140140充分混勻，25℃靜置30min于微量石英比色皿/96孔板中，蒸餾水調(diào)零，測(cè)定660nm處吸光值A(chǔ)，分別記為A空白管和A測(cè)定管，△A=A測(cè)定管-A空白管。空白管只要做一管。計(jì)算公式a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下標(biāo)準(zhǔn)曲線：y =0.1252x-0.0041，R2 = 0.9957，x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/L），y為吸光值。速效磷含量（mg/kg干重）=（△A+0.0041）÷ 0.1252×V樣÷（W×V樣÷V樣總） = 7.987×（△A+0.0041）÷WV樣：樣本體積，0.04mL；V樣總：加入提取液體積，1mL，W：樣本質(zhì)量，約0.1g b. 用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下標(biāo)準(zhǔn)曲線：y =0.0626x-0.0041，R2 = 0.9957，x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/L），y為吸光值。速效磷含量（mg/kg干重）=（△A+0.0041）÷ 0.0626×V樣÷（W×V樣÷V樣總） = 15.97×（△A+0.0041）÷WV樣：樣本體積，0.04mL；V樣總：加入提取液體積，1mL，W：樣本質(zhì)量，約0.1g注意事項(xiàng)1. 配好的顯色液當(dāng)天用完，變藍(lán)則不能使用。2. ΔA線性范圍為：0.01-1.5。3. 標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍為：0.1mg/L-20mg/L。
土壤谷氨酰胺酶(solid-glutaminase, S- GLS) 活性測(cè)定試劑盒說明書 微量法 100管/96樣正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：GLS（EC 3.5.1.2）存在于高等動(dòng)物和某些細(xì)菌以及植物根中，催化谷氨酰胺水解成谷氨酸和氨，在氮素代謝中具有重要調(diào)控作用，尤其是調(diào)節(jié)游離氨含量和尿素代謝。測(cè)定原理：S-GLS催化谷氨酰胺水解成L-谷氨酸和氨，利用奈氏試劑檢測(cè)氨增加的速率，即可計(jì)算其酶活性。需自備儀器和用品：臺(tái)式離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍、研缽、甲苯、冰和雙蒸水。試劑組成和配制：試劑一×1瓶，15 mL，4 ℃保存；試劑二×1瓶，40 mL，4 ℃保存；試劑三×1瓶，60 mL，常溫保存；試劑四×1瓶，5 mL，常溫保存；試劑五×1瓶，3 mL，常溫保存；試劑六×1瓶，3 mL，常溫避光保存。測(cè)定步驟：1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至420nm，蒸餾水調(diào)零。2、樣品測(cè)定（在EP管中加入下列試劑）：試劑名稱（uL）測(cè)定管對(duì)照管樣本0.1甲苯2525振蕩混勻，室溫放置15min試劑一100100試劑二400400混勻，37℃水浴2 小時(shí)試劑三525525混勻，8000 g，25℃離心10 min；取上清液，依次加入下列試劑上清液130130試劑四3030試劑五2020試劑六2020混勻，室溫靜置15min，420nm處讀取測(cè)定管和對(duì)照管吸光值，計(jì)算ΔA=A測(cè)定管-A對(duì)照管。對(duì)照管只要做一管。注意：試劑六如出現(xiàn)沉淀，靜置后取上清使用。酶活性計(jì)算：a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 3.8488x+0.0057；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μmol/mL），y為吸光值A(chǔ)。單位定義：每g土樣每min催化谷氨酰胺生成1nmol 氨定義為一個(gè)酶活力單位。 S-GLS（nmol/min/g 土樣）＝(ΔA-0.0057)÷3.8488×V反總÷W÷T=2.27×(ΔA -0.0057)÷W。V反總：反應(yīng)體系總體積：1.05mL；T：反應(yīng)時(shí)間，2h=120min；W：樣本質(zhì)量，g; 1000，μmol到nmol換算系數(shù)。 b.用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 1.9244x+0.0057；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μmol/mL），y為吸光值A(chǔ)。單位定義：每g土樣每min催化谷氨酰胺生成1nmol 氨定義為一個(gè)酶活力單位。 S-GLS（nmol/min/g 土樣）＝(ΔA-0.0057)÷1.9244×V反總÷W÷T=4.55×(ΔA -0.0057)÷W。V反總：反應(yīng)體系總體積：0.525mL；T：反應(yīng)時(shí)間，2h=120min；W：樣本質(zhì)量，g; 1000，μmol到nmol換算系數(shù)。
土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（Solid-N-acetyl-β-D-glucosidase, S-NAG）試劑盒說明書 微量法 100管/48樣正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義： S-NAG是溶酶體中的一種酸性水解酶，由土壤微生物分泌。S-NAG活性變化與機(jī)體某些病理狀態(tài)密切相關(guān)。測(cè)定原理：S-NAG分解β-N-乙酰氨基葡萄糖苷生成對(duì)-硝基苯酚，后者在400nm有＊大吸收峰，通過測(cè)定吸光值升高速率來計(jì)算NAG活性。自備用品：可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、甲苯（不允許快遞）和蒸餾水。試劑組成和配制：試劑一：甲苯5mL×1瓶，4℃保存；（自備）試劑二：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨用前加入10mL蒸餾水，充分溶解備用，用不完的試劑仍-20℃保存；試劑三：液體20mL×1瓶，4℃保存； 試劑四：液體15mL×1瓶，4℃保存； 樣品處理：新鮮土樣自然風(fēng)干或37度烘箱風(fēng)干，過30~50目篩。測(cè)定步驟：1、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至400nm，蒸餾水調(diào)零。2、 加樣表試劑名稱測(cè)定管對(duì)照管風(fēng)干土樣（g）0.020.02試劑一（μL）1010室溫振蕩混勻15min90℃振蕩混勻15min試劑二（μL）130蒸餾水130試劑三（μL）160160混勻， 37℃振蕩反應(yīng)1h后，90℃水浴5min（蓋緊，防止水分散失），流水冷卻，10000g 25℃離心10min，取上清液（在EP管或96孔板中加入下列試劑）上清液（μL）7070試劑四（μL）130130充分混勻，室溫靜置2min后， 400nm處測(cè)定吸光值A(chǔ)，計(jì)算ΔA=A測(cè)定管-A對(duì)照管。每個(gè)測(cè)定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管。S-NAG活力計(jì)算：a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 0.00645x -0.0054；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μmol/L），y為吸光值。單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1 μmol對(duì)-硝基苯酚定義為一個(gè)酶活力單位。S-NAG活力（μmol/d/g 土樣）＝ (ΔA+0.0054) ÷0.00645×V反總÷W÷T =55.81×(ΔA+0.0054)T：反應(yīng)時(shí)間，1h=1/24d； V反總：反應(yīng)體系總體積：3×10-4 L；W：樣本質(zhì)量，0.02g。b.用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 0.0043x -0.0054；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μmol/L），y為吸光值。單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1 μmol對(duì)-硝基苯酚定義為一個(gè)酶活力單位。S-NAG活力（μmol/d/g 土樣）＝ (ΔA+0.0054) ÷0.0043×V反總÷W÷T =83.72×(ΔA+0.0054)T：反應(yīng)時(shí)間，1h=1/24d； V反總：反應(yīng)體系總體積：3×10-4 L；W：樣本質(zhì)量，0.02g。
31011502012822